目的基因工程重组表达2-氧戊二*脱*酶复合体E2(OGDC-E2)融合蛋白.方法用PCR方法扩增得到OGDC-E2的基因片段,*表达载体pET28a(+),构建重组表达载体pET28a(+)-OGDC-E2,测序正确后在大肠杆菌BL21(DE3)中表达.结果获得OGDC-E2融合蛋白,经SDS-PAGE分析,相对分子质量与预期大小一致;经免疫学鉴定,重组抗原片段具有抗线粒体抗体二亚型(AMA-M2)的免疫原*.结论基因重组表达的融合蛋白将有利于原发*胆汁*肝硬化(PBC)的实验诊断.
第2篇：重组融合蛋白GX1-rmhTNFα的克隆、表达及鉴定
目的:构建胃癌新生血管导向*肽GX1与新型人肿瘤坏死因子(GX1-rmhTNF)基因的原核表达载体,表达GX1-rmhTNF蛋白.方法:利用基因工程方法将胃癌血管特异*结合肽融合在新型人肿瘤坏死因子α的氨基末端,构建GX1-rmhTNF原核表达载体,在大肠杆菌进行表达.对表达产物进行SDS-PAGE电泳分析和Westernblot检测分析.结果:成功构建了GX1-rmhTNF重组融合表达质粒,表达的蛋白经SDS-PAGE电泳分析,在相对分子质量(Mr)约18000处出现了1条新生的蛋白条带,该表达蛋白具有与TNFα单克隆抗体特异*的结合能力.结论:成功构建了GX1-rmhT-NF基因的原核表达载体并在原核细胞中表达了该产物,为下一步GX1-rmhTNF的纯化奠定了基础.
第3篇：人朊蛋白基因的克隆与原核表达
以人血液中提取的总DNA为模板,克隆朊蛋白(prionprotein,PrP)基因Prnp的开放阅读框(ORF),与pMD-18T载体连接后转入E.coliJM109,用Blast软件比较重组质粒序列,结果表明获得的人Prnp的ORF与Genbank登录的相应核苷*序列最高同源*为99.6%,推导的氨基*序列同源*为99.8%.将编码人成熟PrP的基因定向克隆到pET-30a(+)表达载体,将重组质粒pET-homPrP转化E.coliBL21(DE3),在37℃下用1.0mmol/LIPTG诱导,重组融合蛋白获得高效表达,SDS-PAGE显示表达产物以包涵体形式存在,占菌体总蛋白的20%～25%.用Ni-NTA树脂亲和层析纯化了表达产物.Western-blotting分析表明,融合蛋白被抗PrP的单克隆抗体特异识别.因此,在大肠杆菌中表达的人成熟PrP融合蛋白可以作为制备PrP抗体的免疫原.
刘永生,陈豪泰,张杰,谢庆阁,LIUYong-sheng,CHENHao-tai,ZHANGJie,XIEQing-ge(*农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室,农业部畜禽病毒学重点开放实验室,甘肃,兰州,730046)
杨孝朴,YANGXiao-pu(甘肃农业大学动物医学院,甘肃,兰州,730070)